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| 品牌 | 河北潤步 |
| 用途 | 甜味劑 |
| 型號 | 食品級 |
| 別名 | 低聚木糖 |
| CAS編號 | 87-99-0 |
| 有效物質(zhì)含量 | 99% |
低聚木糖 食品級低聚木糖 低聚木糖價(jià)格報(bào)價(jià) 低聚木糖生產(chǎn)廠家
1)耐高溫木聚糖內(nèi)切酶的制備：將以耐耐高溫木聚糖內(nèi)切酶基因構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-28b-CoXynA熱激轉(zhuǎn)化進(jìn)入EscherichiacoliTransetta(DE3)宿主，構(gòu)建表達(dá)耐高溫木聚糖內(nèi)切酶的基因工程菌。將上述基因工程菌于37℃培養(yǎng)，當(dāng)菌液OD600值達(dá)到0.8時(shí)，在37℃條件下，使用異丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)6h，后經(jīng)高壓均質(zhì)法破碎菌體后，將菌液上清依次過親和層析柱(鎳柱)、陰離子交換柱和分子篩(Superdex75)后制得耐高溫木聚糖內(nèi)切酶酶液(5.1mg/mL)。耐高溫木聚糖內(nèi)切酶在NCBI數(shù)據(jù)庫中的編號為ADQ03732。
2)雙功能木聚糖水解酶的制備：將以雙功能木聚糖水解酶基因構(gòu)建的重組質(zhì)粒pET-28b-CLH10熱激轉(zhuǎn)化進(jìn)入EscherichiacoliBL21-Gold(DE3)宿主，構(gòu)建表達(dá)雙功能木聚糖水解酶的基因工程菌。將上述基因工程菌于37℃培養(yǎng)，當(dāng)菌液OD600值達(dá)到0.8時(shí)，降溫至18℃，在18℃條件下，使用異丙基硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)12h，后經(jīng)高壓均質(zhì)法破碎菌體后，將菌液上清依次過親和層析柱(鎳柱)和分子篩(Superdex75)后制得雙功能木聚糖水解酶酶液(4.9mg/mL)。雙功能木聚糖水解酶在NCBI數(shù)據(jù)庫中的編號為WP014043093。
3)底物預(yù)處理：將玉米芯粉碎，烘干后過60目篩后稱重。
4)酶解反應(yīng)：在50mL的密閉容器中進(jìn)行10mL酶催化體系。稱取10％wt玉米芯為底物，加入300U/mL雙功能木聚糖水解酶。在pH7.0，90℃水浴，搖床轉(zhuǎn)速300rmp，反應(yīng)24h。向上述所得反應(yīng)液中加入200U/mL雙功能木聚糖水解酶，在75℃水浴搖床，轉(zhuǎn)速200rmp，反應(yīng)24h，離心獲得包含木寡糖的酶解上清液。以滅活的酶液執(zhí)行相同方法作為空白對照。
5)產(chǎn)物分析：經(jīng)HPLC分析，產(chǎn)物中含木寡糖324mg，其中木二糖97mg、木三糖178mg、木四糖49mg。
